1차년도의 연구에서 가장 효과적인 결핵균의 성장촉진 결과를 보여준 Mycobacterium kansasii의
세포벽성분 추출액을 대상으로 2차년도 연구에서는 그것의 대량생산 방법을 최적화시키고, 이 결핵
균 성장촉진인자를 포함하고 있는 신속배양 배지를 대량으로 생산하여 M. tuberculosis H37Rv, K,
HNH878 결핵 균주들을 비롯한 임상분리 결핵균주들과 결핵환자의 객담 검체를 가지고 유용성을 평
가하는 실험을 수행하였음.
¡ 결핵균 성장촉진인자의 대량생산과 정량화
- M. kansasi i 균주를 표면배양과 진탕배양의 두 가지 배양방법을 병행하여 균체를 대량으로 확보하였음.
- 표면배양한 M. kansasii 균체로부터 1차년도에 확립한 추출방법을 이용하여 결핵균 성장촉진인자
를 대량 생산하였음.
- 진탕배양한 M. kansasii에 lysozyme 또는 glycine을 수확하기 전에 처리하여 균체와 배양 상층액을
확보하였으며, 균체로부터는 sonicator 또는 French press 두 가지 방법을 이용하여 결핵균 성장
촉진인자를 대량 생산하였음.
- M. kansasii 세포벽성분 추출액 내의 결핵균 성장촉진인자의 양을 정량하기위하여 단백질과 당 성
분의 측정방법을 확립하였으며 성장촉진인자의 양을 나타내는 지표로 사용하였음.
¡ 결핵균 신속배양용 배지의 생산 및 평가
- M. kansasii 세포벽성분 추출액을 M7H9 액체 배지 또는 BacT/Alert 배양 배지에 0, 1, 2, 5,
10%씩 첨가하여 결핵균 신속배양 배지를 대량 생산하였음.
- 결핵균의 성장곡선 분석으로부터 M. kansasii 세포벽성분 추출액이 활발히 증식하고 있는 지수
성장기의 결핵균 성장을 촉진하는 것을 밝혔음.
¡ BacT/Alert system을 이용한 결핵균 신속배양 배지의 기존 배지와 비교 평가
- 결핵균 신속배양 배지에서는 성장이 비교적 느린 임상분리 균주인 M. tuberculosis K의 성장을
기존배지에서보다 1~2.5일 빨리 detection할 수 있었음.
- 41 종의 임상분리 결핵균과 30개의 결핵환자 객담을 접종하여 TTD 값를 측정하여 신속배양
배지의 유용성을 평가하였음.
¡ 결핵균 성장촉진인자의 생산기법 및 신속배양 배지의 제조법 확립
- 연구 결과를 바탕으로 최적화된 결핵균 성장촉진인자의 생산방법과 신속배양 배지의 제조법을
제시하였음.
- 결핵균 신속배양 배지를 이용한 최적화된 배양 검사법의 프로토콜을 완성하여 기술하였음.