1. 비정형 이질균주 3종에 대한 단클론 항체개발
본 과제에서 단클론 항체를 제작하기 위해 사용된 비정형 이질균은 21. S.flexneri
3(4), 7(8), 196. S.flexneri Poly B;un, 838. S.flexneri IV;un 이상 3종으로 구성되어 있
으며, 이는 모두 국내 분리주로써 질병관리본부로 부터 제공받아 사용되었다.
상기와 같은 항원을 활용하여 제작된 단클론항체들은 자가 항원에 대한 반응성이 매우
우수하여 연구 목적을 충분히 달성한 것으로 판단된다.
이러한 단클론 항체군들은 자가 항원이 아닌 다른 비정형 이질균과의 교차반응성은 없
는 것으로 확인되었고, 기존의 정형 이질균주와 다양한 대장균 균주에서는 교차반응성
이 존재하는 것으로 확인되었다.
우선, 비정형 이질균 21. S.flexneri 3(4), 7(8)을 이용해 제작된 단클론 항체는 총 20종
이며, 이 항체들은 Shigella B2b와 모두 교차 반응을 나타내었다. 또한 비정형 이질균
196. S.flexneri Poly B;un을 이용해 제작한 단클론 항체는 총 38종으로, 이중 24종은
Shigella B group과 교차반응을 나타내지 않으나, 14종은 Shigella B1b, B2b, B4a, B4b,
B6, Bx, By와 모두 교차 반응성이 있음을 확인하였다. 또한 이러한 14종의 단클론 항체
군은 Shigella B group 이외의 A, C, D group과 E.coli O91, O109, O115 등과의 교차반
응성을 조사한 결과, 1F2, 2H1, 5G10 단클론 항체는 Shigella-A3,5, C5, E. coli O115와
교차반응성이 있고, 1G10, 9C10, 15A5 단클론 항체는 Shigella-A3,5, C5, DII, E. coli
O115와 반응성이 있으며, 2C3 단클론 항체는 Shigella-C2와 반응하고, 6F6 단클론 항체
는 E. coli O91과 교차반응을 보였다. 나머지 6종 (6B3, 7C2, 8B11, 9G1, 10D4, 20E3)의
단클론 항체는 다른 균주와 교차반응을 보이지 않았음을 확인하였다.
이러한 결과로 볼 때 본 과제를 통해 생산된 비정형 이질균에 대한 단클론 항체들과
관련하여 다른 병원체와의 연관성 등 향후 추가 연구를 지속해야할 필요성이 충분하다
고 판단된다. 또한 지속적인 연구를 통해 새로운 지표물질로서 많은 기여를 할 것으로
사료된다.
2. 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 독소에 대한 단클론 항체개발
클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 독소의 서로 다른 epitope을 인지하는 단클론 항체를 제
작하기위해 독소를 구성하고 있는 N-domain과 C-domain에서 각기 유래한 재조합 단
백질을 각기 제작하여 항원으로 활용하는 것이 바람직하다고 판단하였다. 따라서 두 가
지 재조합 단백질을 면역항원으로 이용하여 단클론 항체의 제작을 수행하였으며, 연구
방법에 기술한 바와 같은 과정을 거쳐 각 항원에 대한 단클론 항체의 제작을 성공적으
로 수행하였다. N-domain의 재조합 항원에 대한 단클론 항체는 33종이 제작되었고, C-domain의 재조합 항원에 대한 경우는 총 31종의 단클론 항체가 선별되었다. 이러한
단클론 항체들 중에서 세포주의 증식성이 우수하고 자가 반응성이 양호한 세포주 8종
(N-domain 3종 5C8, 9A7, 10H11, C-domain 5종 2C9, 3C6, 4C8, 5A11, 10F10)을 선별
하여 단클론 항체의 제작을 완료하였고, 이들에 대한 자가항원 반응성 및 상호간의 교
차반응성을 확인하여 본 과제에서 목표한 바대로 서로 다른 epitope에 대한 단클론 항
체 확보에 성공하였다. 각기 다른 domain에서 유래한 재조합 단백질에 교차반응성이 나
타나지 않으므로 두 가지 군의 단클론 항체들은 서로 다른 epitope에 반응한다고 판단
하였다.
또한 실제 병원체의 배양을 통해 얻은 독소와의 반응성을 평가한 결과 실제 독소와도
매우 특이적인 반응성이 있음을 확인하였으므로 향후 관련 병원체의 진단에 적극 활용
될 수 있을 것으로 기대된다.